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摘要:本文采用灵芝深层发酵技术，用0.03% LiCl诱变灵芝原生质体，发酵培养，测定胞外三萜含量，探讨酶法提取胞外三萜条件，同时进行扩大试验。结果表明：出发株胞外三萜含量为107.772ug/mL,经0.03% Licl诱变后胞外三萜含量为436.530ug/mL，诱变后比出发菌株三萜含量提高3倍。胰蛋白酶提取胞外三萜最适条件为加酶量6.0%、酶解时间80min、酶解温度40℃、pH 8.0。扩大试验：罐压在0.05MPa左右，转速150r/min，通气量在1050L/h，温度在25℃-27℃之间，培养6-9天。3-7天菌种生长较快，然后趋于平缓，三萜含量可达403.254ug/mL，比出发菌株提高2.7倍。
关键词灵芝；诱变；氯化锂；三萜类化合物；扩大试验
目录
摘要
Abstract
1 绪论-1
1.1 灵芝的概况-1
1.1.1 灵芝的化学成分-1
1.1.2灵芝三萜的结构及功能-1
1.2 诱变的原理和概念-2
1.2.1 原生质体-2
1.2.1.2原生质体技术-2
1.3 原生质体诱变方法-3
1.3.1 诱变育种的概念-3
1.3.2诱变育种的分类-3
1.4灵芝三萜的提取与检测-3
1.4.1灵芝三萜的提取方法-3
1.4.2灵芝三萜的检测方法-4
1.5 本课题研究内容及意义-5
2 材料与方法-6
2.1 实验材料与仪器-6
2.1.1 试验菌种-6
2.1.2 培养基-6
2.1.3 试剂-6
2.1.4 仪器设备-7
2.2 实验方法-7
2.2.1 灵芝菌种的活化与培养-7
2.2.2原生质体的制备-7
2.2.3 原生质体的诱变与再生-8
2.2.5灵芝三萜的测定-8
2.2.6 酶法提取胞外三萜含量-9
2.2.7 扩大试验-10
3 结果与讨论-12
3.1灵芝菌种发酵液三萜含量的测定-12
3.2酶法提取胞外三萜含量-12
3.2.1酶种类的选择-12
3.2.2胰蛋白酶提取胞外三萜-14
3.3.1酶解时间对三萜提取影响-14
3.3.2 pH对三萜提取影响-14
3.3.3 酶液浓度对三萜含量影响-15
3.3.4 温度对三萜提取的影响-15
3.4扩大试验中灵芝发酵液三萜含量的测定-16
结论-18
致谢-19
参考文献-20