更新时间：09-16 （艾米）提供原创文章
摘要:琼胶酶可以用于降解琼胶生产各种具有生物活性和工业利用价值的琼胶寡糖。与传统酸水解的方法相比，酶解法具有高效性和专一性的特点，反应条件温和，环境污染小，利于产物的分析回收，产物活性高、品质好，为新药、新功能食品的开发提供了新的手段。
本实验通过分子生物学手段将已经合成的琼胶酶基因agav-2插入原核表达载体pET30a(+)中，并转入大肠杆菌BL21中，成功的构建了重组表达载体pET30a(+)-agav-2。在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导下，通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测出琼胶酶得到了大量表达，根据蛋白marker可知表达的琼胶酶分子量为51.5kDa。然后对诱导条件进行优化确定最佳诱导温度为35℃，最佳诱导时间为9h，最佳IPTG终浓度为0.1mM。
酶理化特性实验确定了该琼胶酶最适温度为45℃，最适pH值为9.0，Mg2+、Ca2+ 对酶具有激活作用，Na+、Mn2+、Fe2+、Ba2+、Cu2+、Ag+对琼胶酶的活力没有显著影响，而Fe3+、NH4+对琼胶酶的活性有抑制作用。酶的稳定性实验显示，100℃处理30min仍有较高的活性，对pH的适用范围也比较大。具有很好的工业化生产潜力。
关键词：原核表达；琼胶酶；诱导条件优化；酶学特性