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摘要:甾体化合物又称类固醇,是一类以环戊烷多氢菲为母核的化合物,具有独特生理功能。其中屈螺酮是一种设计用于模仿孕酮效果的人工合成新型孕激素,与传统口服避孕药中所含的孕激素结构完全不同,是目前药理学特性最接近天然孕酮的孕激素,兼具抗盐皮质激素和抗雄激素活性的独特优势。7α,15α-二羟基雄烯醇酮是合成屈螺酮最新工艺的关键中间体,亚麻刺盘孢霉(Colletotrichum lini)可将DHEA转化为7α,15α-二羟基雄烯醇酮。
本实验通过对亚麻刺盘孢霉Colletotrichum lini ST-1的孢子进行紫外诱变,获得了突变株A1,使产物的得率提高了5.2%。在此基础上,通过对其原始的发酵培养基成分进行优化,确定了优化碳源、氮源以及无机盐等。采用优化的培养基配方:葡萄糖 15 g/L,玉米浆9 g/L, 酵母粉9 g/L,NaCl 0.2 g/L、MgCl2 0.2 g/L、KH2PO4 0.2 g/L,7α,15α-二羟基雄烯醇酮的得率提高了18.0%。
关键词:屈螺酮;亚麻刺盘孢霉;紫外诱变;发酵优化
目录
摘要
ABSTRACT
第1章 绪论-1
1.1 甾体化合物概述-1
1.2 国内外研究现状及应用前景-2
1.3甾体化合物的生物转化研究-4
1.4课题研究的主要内容-6
第2章 材料与方法-7
2.1 实验材料-7
2.1.1 菌种-7
2.1.2 主要试剂-7
2.1.3 培养基-8
2.1.4 主要实验仪器-8
2.2 实验方法-8
2.2.1 培养条件-8
2.2.2 孢子悬液的制备-8
2.2.3 紫外致死率测定-8
2.2.4 诱变选育-9
2.2.5 发酵培养基成分的优化-9
2.3 分析方法-9
3.1.1 产物提取-9
3.1.1 产物定性检测-9
3.1.1 产物定量检测-9
第3章 结果与讨论-11
3.1 紫外致死率-11
3.1.1 菌株形态观察-11
3.1.2 紫外致死率曲线测定-12
3.2 紫外诱变-14
3.3 遗传稳定性实验-15
3.4 转化培养基成分优化-16
3.4.1 碳源的优化-16
3.4.2 氮源的优化-16
3.4.3 复合氮源的优化-17
3.4.4 无机盐的优化-18
3.4.5 优化培养基转化实验-18
结论与展望-21
参考文献-23
致 谢-25