PTEN载体的构建、表达和纯化.doc

更新时间：01-11    （晓萱）提供原创文章

摘要:目的：PTEN是重要的抑癌基因，对于肿瘤的治疗、研究等需要大量的PTEN蛋白。构建PTEN-pet28a重组载体，在大肠杆菌中进行原核重组表达。IPTG诱导蛋白表达，SDS-PAGE检测。 方法：将构建好的PTEN-pet28a质粒导入大肠杆菌BL-21，IPTG诱导，电泳检测所产生的蛋白。随后用8mol尿素进行溶解，SDS-PAGE检测融解情况。 结果：发现所需蛋白存在于包含体内，几乎不存在上清中。 结论：通过本实验能够诱导出所需的目的蛋白，但存在包含体内。包涵体溶解，为后续实验做准备。

关键词：PTEN  诱导蛋白   包涵体溶解

目录

摘要

Abstract

引言.1

1 材料与方法.2

1.1 材料.2

1.2方法..2

1.2.1 GST-PTEN-pet2原核表达载体构.2

1.2.1.1目的基因与pet-28a质粒连接.  .  2

1.2.2 转入大肠杆菌BL-21及诱导基因表达 .2

1.2.2.1重组载体的转化. . .2

1.2.2.2 目的蛋白的诱导表达及检测   .3

1.2.2.3 PTEN表达菌株的扩大培养及诱导3

1.2.2.4 目的蛋白的检测. .  3

1.2.3  包含体的溶解. 3

1.2.3.1  超声溶解包涵体.3

1.2.3.2 变性剂溶解包涵体.3

1.2.3.3 包涵体溶解效果检测. 3

2 结果4

2.1 双酶切结果4

2.2 基因检测结果.4

2.3 蛋白诱导结果.5

2.4批量诱导蛋白观察结果6

2.5 包涵体溶解情况7

2.6 变性剂溶解情况7

结论.8

致谢.9-10

参考文献..11