更新时间：01-11 （晓萱）提供原创文章
摘要:目的：以MusD为研究对象检测SAMHD1抑制内源性逆转录病毒作用，从而发现SAMHD1是否抑制MusD 以及SAMHD1抑制作用的关键性位点。
方法：采用内源性逆转录病毒MusD-neo作为研究对象，其整合至宿主基因组后，可以表达neo基因，从而可以通过G418筛选检测其转座情况。MusD-neo与SAMHD1及其突变体共转染哺乳动物细胞，转染后进行G418筛选，然后观察SAMHD1抑制MusD的效果。
结果：SAMHD1抑制MuSD克隆明显。去掉其中的SAM结构域后抑制依旧明显，包含HD结构域的截断体45-626，111-626都具有抑制作用，但抑制效果不同。而去掉HD结构域后，抑制效果明显降低。说明HD结构域是SAMHD1抑制作用的关键。核定位信号突变体AAPA制作用非常明显。酶活性位点突变体233A,311A，HDAA抑制作用受到一定程度的影响。
结论：SAMHD1抑制内源性逆转录病毒明显；HD结构域是其抑制作用的关键；截断体45-626，111-626都具有抑制作用，但抑制效果不同；
关键词： SAMHD1，内源性逆转录病毒, 抗病毒作用, 限制因子
目录
摘要
Abstract
引言-1
1 实验材料-3
1.2质粒及质粒载体-3
1.3工具酶和分子量标准-4
1.4 DNA制备试剂盒-4
1.5主要试剂和器材-4
1.6溶液配制-4
1.7 细胞系-5
2实验方法-6
2.1质粒的构建-6
2.1.1 PCR反应-6
2.1.2从琼脂糖凝胶中回收DNA片段-7
2.1.3目片段及载体DNA的酶切（NEB）-7
2.1.4 酶切产物的回收-8
2.1.5连接反应-8
2.1.6连接产物转化化学感受态细胞-9
2.1.7重组质粒的提取及定-9
2.1.8质粒的大提取-9
2.2细胞培养相关的复苏，传代，冻存-11
2.3细胞转染-11
2.4细胞裂解-12
2.5蛋白电泳-12
2.6蛋白质从SDS聚丙烯酰胺凝胶转移至硝酸纤维素（NC）膜（湿式转膜）-13
2.7筛选拮抗G418细胞系-14
3实验结果-15
3.1 SAMHD1抑制MuSD克隆效果-15
3.2 SAMHD1及其结构域突变体抑制MuSD克隆效果-16
3.3 SAMHD1及其突变体抑制MuSD克隆效果-17
结论-20
参考文献-21
致谢-22